提的质粒怎么电泳成弥散条带了

齐振国 2019-12-21 23:12:00

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提取的质粒跑电泳有两条带是怎么回事不知道你提的质粒应该是多大的?提取到的质粒可能出现三条带,最前面的是双链闭合环状的,其次是线状的,最后面的是会出现一些复制中间体.感觉2、4的带跟1、3中的任何一条都不同,如果24是酶切后的线性条带,那3前面那条和1就是闭环的,3后面的是复制中间体.后面的带''号的是什么?仔细看了下,124也是两条带,只是后面那条量少,不易观察。如果24是处理后的,我感觉前面那条带的电泳迁移率是有变化的,说明你用的化合物跟质粒有相互作用。质粒有两条带时不好准确判断是哪两条,建议你用个单一切点的酶处理一下质粒,也就是让它产生线状DNA,然后作为对照就知道样品里的两条带是哪两条了。
粱兆强2019-12-21 23:21:29

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  • 嘛,这个原因多了1、你确定你提取质粒收的菌没有被污染?我曾经就遇上过这种事,提了N遍都没结果,泪奔……最后重新挑单菌落接种重提。你得确定你的菌里面有质粒哦~2、你琼脂糖凝胶浓度和质粒大小相配么?假如浓度太低的话没跑一会条带就跑出胶外了~还有,你跑了多少时间?3、你SolutionII和SolutionIII是不是超时了?或者震荡太剧烈弄成碎片了?4、如果提取质粒的是DH5a的菌可以省下酚氯仿抽提这步,你看看是不是这部出问题了?5、无水乙醇沉淀时候最好冰浴20分钟,我后来发现用预冷的无水乙醇沉淀效果不如冰浴好。6、70%乙醇洗涤,嘛,你要是取质粒来做转化的洗不洗也罢。你可以先不洗,先检测你是否提出来了7、无水乙醇挥发了再加水——切记这点。
    童蟾素2019-12-22 00:20:19
  • 可能是大肠杆菌里的RNA吧,可能提质粒时加入的RNA酶不太好,RNA没有消化干净。
    米培英2019-12-22 00:08:44
  • 最中间的泳道是你的DNAMarker对吗?第一为什么这么粗,是因为你提的质粒浓度比较高所以亮和粗2后面有几条带是正常的,质粒有3种状态,所以理论是有3条带的。我在实验室提的一般是两条,3下面的可能是杂质比如蛋白质,盐等等。我提质粒次数不下500次,可以说你这个质粒提是比较成功的!纯手打。
    齐文榜2019-12-21 23:58:55
  • 质粒电泳,并不一定会有明显的两条带的,和是否有蛋白污染,电泳液的成分,pH值等都有很大关系。你的图上看,还是有一条比较淡的条带在前面。而粗亮的这条应该就是没有超螺旋的了。
    辛培成2019-12-21 23:39:36

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