金庸无双2黑木崖铁链拿不起来,点蓝星没反应

管琰平 2019-12-21 18:32:00

推荐回答

用技能攻击。
米大斌2019-12-21 19:14:56

提示您:回答为网友贡献,仅供参考。

其他回答

  • 意思就是青龙转两下,朱雀转5下,风雷转1下,天香转6下。
    黄甘霖2019-12-21 19:39:15
  • 现在最新的是霸者篇,已经包含前几个版本的内容。
    齐文玉2019-12-21 18:58:00
  • 去田伯光家里嫖妓。嫖完以后就能收田伯光了。
    龙安顺2019-12-21 18:42:00

相关问答

是单链cDNA,想合成双链cDNA需要另外操作:一、cDNA第二链的合成:1.第一链反应完成后,取2ul一链产物-20℃冰箱中保存,待电泳检测。其余的产物合并,混匀,然后顺序加入下列试剂promega:20ul  10×DNAPolymeraseIbuffer6ul   10mMdNTP自己配制xul   ddH2O1ul   RNaseH2U/ul10ul  DNAPolymeraseI10U/ul总体系为200ul;2.混匀后,16℃反应2.5小时;3.70℃灭活10分钟;4.反应完成后,得到200ulcDNA第二链反应体系,将此体系置于冰上;5.取2ul二链产物,同保存的一链产物一起电泳鉴定。同时上1kbladder,确定双链的大小范围。注:一链,二链的电泳图是smear,且二链稍比一链大一些。二、双链cDNA末端补平:1.在第二链反应体系中,顺序加入下列试剂promega:6ul  10mMdNTP2ul  T4DNAPolymerase8.7U/ul2ul  BSA10mg/ml2.稍微离心混匀反应物,37℃反应至少30分钟,然后75℃灭活10分钟;3.加入等体积酚/氯仿/异戊醇,剧烈振荡后,常温下13000g离心5分钟;4.离心后,吸取上清于另一1.5mleppendof管中,加入等体积氯仿,上下颠倒几次混匀后,常温下13000g离心5分钟;5.吸取上清至另一eppendof管,加入1/10V3MNaAcPH5.2和2.5V预冷的无水乙醇,混匀,-20℃放置过夜以沉淀双链cDNA;6.第二日,将昨日沉淀物在4℃,13000g离心60分钟以充分沉淀双链cDNA;7.离心完毕,弃上清,加入1ml70%乙醇洗涤沉淀,常温下13000g离心5分钟;8.离心完毕,弃上清,干燥沉淀至无乙醇气味.注:第3,第4步可以用PCR纯化试剂盒代替。PCR纯化试剂盒操作流程:1.溶液PE使用前应加入适量体积95%-100%的乙醇,混匀。2.向200ul二链补平产物中加入5倍体积的bufferPB,混匀。3.加入spincolumn中,13000rpm离心1min。4.加入0.75mlbufferPE,13000rpm离心1min。5.13000rpm,再离心1min。6.将spincolumn放入一新的离心管中,加入50ulbufferEB,静置10min。7.13000rpm离心2min。8.加入30ulbufferEB,静置10min。9.13000rpm离心2min。10.加入1/10体积3M的NaAc,2.5倍体积无水乙醇,混匀,-20℃沉淀过夜。