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1呼吸链的概念酶和辅酶在线粒体内膜上按一定顺序排列组成的递氢或递电子体系称为呼吸链。2两条呼吸链的组成和排列顺序：1组成和作用：呼吸链主要成分有如下五类：①辅酶I尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸，NAD+和辅酶II尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，NADP+：NAD+作为许多不需氧脱氢酶的辅酶，将作用物的脱氢与呼吸链的传递氢过程联系起来，是递氢体。②黄素酶或黄素蛋白FP：黄素酶种类很多，但辅基只有两种：黄素单核苷酸FMN和黄素腺嘌呤二核苷酸FAD。FMN和FAD分子能可逆地进行加氢和脱氢反应，故也是递氢体，其分子中每次能接受两个氢原子。③铁硫蛋白Fe-S：铁硫蛋白是一类在分子中含有非血红素铁和对酸不稳定的含硫蛋白质。铁硫蛋白种类较多，在线粒体内膜上往往与黄素酶或细胞色素结合成复合物存在。铁硫蛋白分子中所含的Fe-s构成活性中心，称为铁硫中心Fe-S，其中的铁能可逆地进行氧化还原反应，每次传递一个电子。④辅酶QCoQ：辅酶Q为一脂溶性醌类化合物，广泛存在于生物界，又名泛醌。其分子中的苯醌结构能可逆地进行加氢和脱氢反应，是递氢体。⑤细胞色素Cyt：细胞色素是一类以铁卟啉为辅基的结合蛋白质，可分为a、b、c三大类，每类又有若干种。主要的细胞色素有a、a3、b、c和c1。它们共同的作用特点是作为电子传递体，其卟啉环中的铁离子进行可逆的氧化还原反应。细胞色素a与a3不易分开，统称为细胞色素aa3，亦称为细胞色素氧化酶。2呼吸链各成分的排列顺序线粒体内参与氧化磷酸化的呼吸链主要有两条，即NADH氧化呼吸链和FADH2氧化呼吸链。这两条呼吸链的组成和排列顺序是。
齐文涛2019-12-21 19:14:17
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长呼吸链，NADH开始的，生成2.5个ATP。短呼吸链，FADH2开始的，生成1.5个ATP。至于穿梭机制，是考虑到NADH在哪里生成的。如果是无氧呼吸，在胞液生成的NADH，由于NADH自己不能自由穿梭于线粒体膜，所以需要借助其他物质。有两种穿梭机制。一种是苹果酸穿梭，一种是α-磷酸甘油穿梭。苹果酸穿梭的方式，在线粒体内还是NADH，所以仍然是2.5个ATP。α-磷酸甘油穿梭，在线粒体内生成的是FADH2，就是1.5个ATP。
齐文涛2019-12-21 19:38:42
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呼吸链又称电子传递链，是由一系列电子载体构成的，从NADH或FADH2向氧传递电子的系统。还原型辅酶通过呼吸链再氧化的过程称为电子传递过程。其中的氢以质子形式脱下，电子沿呼吸链转移到分子氧，形成粒子型氧，再与质子结合生成水。放出的能量则使ADP和磷酸生成ATP。电子传递和ATP形成的偶联机制称为氧化磷酸化作用。整个过程称为氧化呼吸链或呼吸代谢。在葡萄糖的分解代谢中，一分子葡萄糖共生成10个NADH和2个FADH2，其标准生成自由能是613千卡，而在燃烧时可放出686千卡热量，即90％贮存在还原型辅酶中。呼吸链使这些能量逐步释放，有利于形成ATP和维持跨膜电势。原核细胞的呼吸链位于质膜上，真核细胞则位于线粒体内膜上。二、构成呼吸链包含15种以上组分，主要由4种酶复合体和2种可移动电子载体构成。其中复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、辅酶Q和细胞色素C的数量比为1：2：3：7：63：9。1.复合体Ⅰ即NADH：辅酶Q氧化还原酶复合体，由NADH脱氢酶和一种铁硫蛋白组成，将从琥珀酸得到的电子传递给辅酶Q。3.辅酶Q是呼吸链中唯一的非蛋白氧化还原载体，可在膜中迅速移动。它在电子传递链中处于中心地位，可接受各种黄素酶类脱下的氢。复合体Ⅲ辅酶Q：细胞色素C氧化还原酶复合体，是细胞色素和铁硫蛋白的复合体，把来自辅酶Q的电子，依次传递给结合在线粒体内膜外表面的细胞色素C。细胞色素类都以血红素为辅基，红色或褐色。将电子从辅酶Q传递到氧。根据吸收光谱，可分为三类：a,b,c。呼吸链中至少有5种：b、c1、c、a、a3按电子传递顺序。细胞色素aa3以复合物形式存在，又称细胞色素氧化酶，是最后一个载体，将电子直接传递给氧。从a传递到a3的是两个铜原子，有价态变化。复合体IV：细胞色素C氧化酶复合体。将电子传递给氧。
黄男雄2019-12-21 18:57:16
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线粒体呼吸链酶一共有5个,他们分别是NADH——由FADH2开始的呼吸链由复合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ构成,来自FADH2的电子不经过复合物Ⅰ。
黄百煜2019-12-21 18:41:08
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RNA反转录的cDNA是单链的还是双链的是单链cDNA，想合成双链cDNA需要另外操作：一、cDNA第二链的合成:1.第一链反应完成后,取2ul一链产物－20℃冰箱中保存，待电泳检测。其余的产物合并，混匀，然后顺序加入下列试剂promega:20ul10×DNAPolymeraseIbuffer6ul10mMdNTP自己配制xulddH2O1ulRNaseH2U/ul10ulDNAPolymeraseI10U/ul总体系为200ul;2.混匀后,16℃反应2.5小时;3.70℃灭活10分钟;4.反应完成后,得到200ulcDNA第二链反应体系,将此体系置于冰上;5．取2ul二链产物，同保存的一链产物一起电泳鉴定。同时上1kbladder，确定双链的大小范围。注：一链，二链的电泳图是smear，且二链稍比一链大一些。二、双链cDNA末端补平:1.在第二链反应体系中,顺序加入下列试剂promega:6ul10mMdNTP2ulT4DNAPolymerase8.7U/ul2ulBSA10mg/ml2.稍微离心混匀反应物,37℃反应至少30分钟,然后75℃灭活10分钟;3.加入等体积酚/氯仿/异戊醇,剧烈振荡后,常温下13000g离心5分钟;4.离心后,吸取上清于另一1.5mleppendof管中,加入等体积氯仿,上下颠倒几次混匀后,常温下13000g离心5分钟;5.吸取上清至另一eppendof管,加入1/10V3MNaAcPH5.2和2.5V预冷的无水乙醇,混匀,-20℃放置过夜以沉淀双链cDNA;6.第二日,将昨日沉淀物在4℃,13000g离心60分钟以充分沉淀双链cDNA;7.离心完毕,弃上清,加入1ml70%乙醇洗涤沉淀,常温下13000g离心5分钟;8.离心完毕,弃上清,干燥沉淀至无乙醇气味.注：第3，第4步可以用PCR纯化试剂盒代替。PCR纯化试剂盒操作流程：1．溶液PE使用前应加入适量体积95％－100％的乙醇，混匀。2．向200ul二链补平产物中加入5倍体积的bufferPB，混匀。3．加入spincolumn中，13000rpm离心1min。4．加入0.75mlbufferPE，13000rpm离心1min。5．13000rpm，再离心1min。6．将spincolumn放入一新的离心管中，加入50ulbufferEB，静置10min。7．13000rpm离心2min。8．加入30ulbufferEB，静置10min。9．13000rpm离心2min。10．加入1/10体积3M的NaAc，2.5倍体积无水乙醇，混匀，－20℃沉淀过夜。