做反转录的时候，反应温度主要是和所用的反转录酶有关，有些是40C，有些可以达到50C甚至是65C。当然也和所用的引物有关：–ifanoligodT18primerorgene-specificprimerisused,incubatefor30minat50°C.–ifarandomhexamerprimerisused,incubatefor10minat25°Cfollowedby30minat50°C.–fortranscriptionofGC-richRNA,thereactiontemperaturecanbeincreasedto65°C.Terminatethereactionbyheatingat85°Cfor5minutes.如果担心有非特异，可以等到PCR仪的温度升到反应温度再把管子放到机器里。热启动说的主要是酶在正常温度下是没有活性的，需要通过95C反应一段时间，激活酶。一般PCR里面热启动比较常见，逆转录酶不太常见，你可以看说明书再确认一下。